Fabhtcheartú Anailíseoir PCR: Ceisteanna agus Réitigh Coitianta

Is uirlisí riachtanacha i mbitheolaíocht mhóilíneach iad anailíseoirí imoibriúcháin slabhrúil polaiméaráise (PCR), rud a ligeann do thaighdeoirí DNA a mhéadú le haghaidh feidhmchlár ó thaighde géiniteach go diagnóisic chliniciúil. Mar sin féin, cosúil le haon fheiste chasta, is féidir le hanailíseoir PCR fadhbanna a théann i bhfeidhm ar a fheidhmíocht. Tugann an t -alt seo aghaidh ar roinnt ceisteanna coitianta faoiAnailíseoir PCRFabhtcheartú a dhéanamh agus réitigh phraiticiúla a sholáthar ar fhadhbanna coitianta.

1. Cén fáth nach bhfuil mo imoibriú PCR ag méadú?

Ceann de na fadhbanna is coitianta a bhíonn ag úsáideoirí ná neamhábaltacht an imoibrithe PCR chun an sprioc DNA a mhéadú. Is féidir é seo a chur i leith roinnt fachtóirí:

Dearadh Primer Mícheart: Déan cinnte go bhfuil do phríomhairí sonrach don seicheamh sprice agus go bhfuil teocht leá is fearr agat (TM). Bain úsáid as uirlisí bogearraí le haghaidh dearadh primer chun ceangailteach nonspecific a sheachaint.

DNA teimpléad neamhleor: Deimhnigh go bhfuil méid leordhóthanach DNA teimpléad á úsáid agat. Beidh an iomarca mar thoradh ar aimpliú lag nó gan aon aimpliú.

Coscairí sa sampla: Is féidir le hábhair shalaithe sa sampla bac a chur ar imoibriú PCR. Smaoinigh ar do DNA a íonú nó modh eastósctha difriúil a úsáid.

Réiteach: Seiceáil do dhearadh primer, méadaigh tiúchan teimpléad, agus déan cinnte nach bhfuil coscairí i do shampla.

2. Cén fáth a bhfuil mo tháirge PCR an méid mícheart?

Mura bhfuil do mhéid táirge PCR mar a bhíothas ag súil leis, d'fhéadfadh sé fadhb a léiriú leis na coinníollacha imoibriúcháin nó na comhábhair a úsáidtear.

Aimpliú neamh-shonrach: Is féidir leis seo tarlú má cheanglaíonn primer le suíomh neamhbheartaithe. Seiceáil sainiúlacht na bpríomhairí ag baint úsáide as uirlis ar nós BLAST.

Teocht mhícheart anna: Má tá an teocht anála ró-íseal, d'fhéadfadh ceangal neamh-shonrach a bheith mar thoradh air. Leas iomlán a bhaint as teocht anála ag grádán PCR.

Réiteach: Deimhnigh sainiúlacht primer agus an teocht a uasmhéadú chun cruinneas táirgí PCR a fheabhsú.

3. Taispeánann mo Anailíseoir PCR teachtaireacht earráide. Cad ba cheart dom a dhéanamh?

Is féidir le teachtaireachtaí earráide ar anailíseoir PCR a bheith scanrúil, ach is minic gur féidir leo leideanna a sholáthar maidir le fadhbanna féideartha.

Saincheisteanna Calabraithe: Déan cinnte go ndéantar an t -anailíseoir PCR a chalabrú i gceart. Tá seiceálacha cothabhála agus calabraithe rialta ríthábhachtach chun torthaí cruinne a fháil.

Grúpa Bogearraí: Uaireanta, is féidir le bugs bogearraí fadhbanna a chruthú. Atosaigh do ríomhaire agus seiceáil le haghaidh nuashonruithe bogearraí.

Réiteach: Déan tagairt don Lámhleabhar Úsáideora don Chód Earráide Sonrach agus lean na céimeanna fabhtcheartaithe molta. Is féidir le cothabháil rialta cosc ​​a chur ar go leor fadhbanna.

4. Cén fáth a bhfuil mo thorthaí imoibriúcháin PCR neamhréireach?

Is féidir le torthaí neamhréireacha PCR a bheith frustrachas ar chúiseanna éagsúla:

Cáilíocht imoibrí: Cinntigh go bhfuil gach imoibrí, lena n -áirítear einsímí, maoláin, agus DNTPanna, úr agus ar ardchaighdeán. D'fhéadfadh imoibrithe atá imithe in éag nó éillithe a bheith ina gcúis le héagsúlacht.

Calabrú Cycler Teirmeach: D'fhéadfadh socruithe teochta neamhréireacha dul i bhfeidhm ar an bpróiseas PCR. Seiceáil go rialta calabrú an rothaí teirmeach.

Réiteach: Bain úsáid as imoibrithe ardcháilíochta agus déan do rothaire teirmeach a chalabrú go rialta chun torthaí comhsheasmhacha a chinntiú.

5. Conas éifeachtúlacht imoibriúcháin PCR a fheabhsú?

Is féidir le torthaí níos airde agus torthaí níos iontaofa a bheith mar thoradh ar éifeachtúlacht imoibrithe PCR a fheabhsú.

Coinníollacha imoibriúcháin a bharrfheabhsú: turgnamh a dhéanamh ag baint úsáide as tiúchain éagsúla primers, teimpléad DNA agus MGCL2. D'fhéadfadh go mbeadh coinníollacha uathúla ag teastáil ó gach imoibriú PCR maidir leis an bhfeidhmíocht is fearr.

Bain úsáid as einsímí ard-dílseachta: Má tá cruinneas ríthábhachtach, smaoinigh ar úsáid a bhaint as polaiméaráise DNA ardleibhéil chun earráidí a íoslaghdú le linn aimplithe.

Réiteach: Turgnamh optamaithe a dhéanamh chun na coinníollacha is fearr a fháil do do thus PCR ar leith.

Mar achoimre

Fabhtcheartú aAnailíseoir PCRIs féidir leis a bheith ina thasc scanrúil, ach is féidir le tuiscint a fháil ar fhadhbanna coitianta agus ar a gcuid réiteach feabhas mór a chur ar do thaithí PCR. Trí na fadhbanna coitianta seo a réiteach, is féidir le taighdeoirí torthaí PCR a fheabhsú agus torthaí iontaofa a chinntiú in iarratais bhitheolaíochta mhóilíneacha. Is éard atá i gceist le cothabháil rialta, le roghnú cúramach imoibrithe, agus le coinníollacha imoibriúcháin a bharrfheabhsú ná eochracha do anailís rathúil PCR.